Radiometric studies on the oxidation of (U-14C) L-amino acids by drug-susceptible and drug-resistant mycobacteria

Um sistema radiométrico foi utilizado para estudar os padröes de oxidaçäo dos (U-C)L-aminoácidos por micobactérias sensíveis e resistentes a drogas. Foram usadas duas cepas do M. tuberculosis sensíveis a todas as drogas, H Rv e Erdman. As micobactérias resistentes foram M. tuberculosis H Rv resistente a 5 ug/ml de hidrazida, M. bovis, M. avium, M. intracellulare, M. kansasii e M. chelonei. As micobactérias foram inoculadas em frascos estéreis contendo o meio líquido 7H9 e um dos (U-C)L-aminoácidos. Cada micobactéria apresentou um padräo de oxidaçäo de aminoácidos, mas estes padröes näo foram suficientemente diferentes para identificá-la. Aminoácidos complexos como a prolina, fenilalanina e tirosina näo tiveram utilidade na identificaçäo das micobactérias, pois praticamente todos os microorganismos foram incapazes de oxidá-los. Nenhuma combinaçäo de aminoácidos foi capaz de separar as micobacterias sensíveis das resistentes a drogas

Radiometric studies on the oxidation of (1-14C) fatty acids by drug-susceptible and drug-resistant mycobacteria

Um sistema radiométrico foi utilizado para estudar os padröes de oxidaçäo dos (1-14C) ácidos graxos por microorganismos do gênero Mycobacterium sensíveis e resistentes a drogas. Foram usadas duas cepas do M. tuberculosis sensíveis a todas as drogas, H37Rv e Erdman. As micobactérias resistentes foram M. tuberculosis H37Rv resistente a 5 ug/ml de hidrazida, M. bovis, M. avium, M. intracellulare, M. kansasii e M. chelonei. As micobactérias foram inoculadas em frascos estéreis contendo o meio líquido 7H9 com 10% do complexo albumina-dextrose-catalase e 1,0 uCi de um dos (1-14C) ácidos graxos (butírico, hexanoico, octanoico, decanóico, láurico, mirístico, plamítico, esteárico, olêico, linolêico, linolênico). Os frascos foram incubados a 37-C e o 14CO2 produzido pelas micobactérias foi medido durante 3 dias, com uma máquina Bactec-R-301. Embora cada micobactéria apresentasse um padräo distinto de oxidaçäo de ácido graxo, estes padröes näo foram suficientemente diferentes para identificá-la. Nenhuma combinaçäo de ácidos graxos nem a oxidaçäo preferencial de ácidos graxos de cadeias longas ou curtas foi capaz de separar as micobactérias resistentes das sensíveis. Outras experiências com um maior número de micobactérias sensíveis, incluindo estudo da assimilaçäo de substâncias marcadas, säo necessárias para se tentar a diferenciaçäo entre as micobactérias sensíveis e as resistentes a drogas

Radiometric studies of Mycobacterium tuberculosis

A atividade metabólica do M. tuberculosis sob diversas condiçöes experimentais foi estudada utilizando um sistema radiométrico automático, capaz de quantificar o 14CO2 produzido pela oxidaçäo de substâncias marcadas com Carbono-14. As experiências realizadas incluíram: a) vias metabólicas; b) determinaçäo dos tempos de detecçäo para inoculaçöes de diversas magnitudes; c) efeito da filtraçäo sobre a reprodutibilidade dos resultados; d) influência de meio hostil; e) determinaçäo das concentraçöes inibitórias mínimas para hidrazida, estreptomicina, etambutol e rifampicina; f) tempo de duplicaçäo para o M. tuberculosis e M. bovis. Estes microorganismos metabolizaram até 14CO2 o 14C-formato, (U-14C) acetato, (u-14C) glicerol, (1-14C) ácido palmítico, (1-14C) ácido láurico, (u-14C) L-ácido málico, (U-14C) D-glicose e (1-14C) D-glicose, mas näo (1-14C) L-glicose, (u-14C) glicina ou (U-14C) piruvato. Usando 14C-formato, (1-14C) ácido palmítico ou (1-14C) ácido láurico foi possível detectar 10 bacilos/frasco em 24-48 horas e até 10 bacilos/frasco em 16-20 dias. Resultados reprodutíveis foram obtidos sem filtrar a suspensäo de bactérias, desde que cultivadas em meio 7H9 líquido com 0,05% de polissorbato 80 e homogenizadas antes da experiência. Drogas que bloqueiam a síntese protêica apresentaram concentraçäo inibitória mínima menor com o método radiométrico do que com o convencional. O tempo médio de duplicaçäo para o M. bovis e várias cepas de M. tuberculosis com diversas substâncias marcadas foi 9 + ou - 1 horas